一、雞白痢的危害

雞白痢是由雞白痢沙門氏菌引起的傳染性疾病，只感染雞和火雞兩種動物，會降低種雞產(chǎn)蛋率，降低種蛋受精率、孵化率、出雛率和健雛率，降低后代生產(chǎn)性能，感染SPF雞后還會導(dǎo)致胚源活疫苗污染。

雞白痢沙門氏菌原本是一種獸醫(yī)界發(fā)現(xiàn)較早的血清型，但隨著沙門氏菌血清型命名規(guī)則的不斷完善，目前已將雞白痢和雞傷寒這2者具有共同表面抗原的沙門氏菌統(tǒng)稱為雞傷寒血清型，但進一步分為雞白痢和雞傷寒2種生物型，而我國的國家標(biāo)準(zhǔn)則將2者標(biāo)注為“雞-雛沙門氏菌”。

1.雞白痢雞傷寒的生化鑒別

由于雞白痢、雞傷寒具有諸多相似性，需進行有效的區(qū)分。國內(nèi)外對兩個病原已經(jīng)研究上百年時間，傳統(tǒng)的鑒別方式是生化方法，主要通過四個指標(biāo)：葡萄糖產(chǎn)氣、衛(wèi)矛醇、麥芽糖和鳥氨酸脫羧，雞白痢沙門氏菌通常是陰性，雞傷寒沙門氏菌通常為陽性。但通過實驗室的大量樣本驗證，只有衛(wèi)矛醇和鳥氨酸這兩個指標(biāo)更具有特異性。

2.雞白痢、雞傷寒的分子鑒別

因為生化試驗非常費時費力，所以我們希望能快速區(qū)分這兩個病原，鑒于此，授課專家團隊通過基因的快速檢測建立了一系列方法，如基于pegB靶標(biāo)的FRET-PCR和基于fimH靶標(biāo)的PCR-HRM。

3.種雞感染雞白痢沙門氏菌對生產(chǎn)性能的影響

基于早期試驗數(shù)據(jù)的分析，發(fā)現(xiàn)種雞感染雞白痢的產(chǎn)蛋率和出雛率都會大幅下降，無精率和死胚率都會大幅上升。

二、雞白痢的防控

1.雞白痢沙門氏菌的感染特性

（1）禽沙門氏菌病可分為三類：第一類是雞白痢，第二類是禽傷寒，第三類是禽副傷寒。

（2）雞白痢和禽傷寒均由單一病原感染所致，因而具有獨特的感染特性。以宿主的生長史來看，分為兩個階段，以性成熟為分界線：

 ?在性成熟前，雛雞和青年雞感染后，雛雞一般會導(dǎo)致死亡，青年雞會轉(zhuǎn)變?yōu)榫植扛腥净蚵愿腥荆盟幱懈怕是宄u白??；

 ?在性成熟后，雞白痢會迅速進入性器官定植并長期存活，有報道闡述，雞白痢可以在生殖系統(tǒng)存活70周的時間，貫穿整個產(chǎn)蛋周期，且此階段用藥很難清除病原，因而成年雞感染后只能執(zhí)行檢疫凈化。

2.臨床常用的沙門氏菌防控產(chǎn)品

臨床常用的沙門氏菌防控產(chǎn)品一般為抗生素、噬菌體、中草藥、抗菌肽、酸化劑、植物精油、疫苗和益生菌，上述產(chǎn)品對于雞白痢防控而言，僅在青年雞時期有效，成年雞使用只能壓制但不能清除病原，且存在感染抗體檢測，因而不推薦使用。

3.雞白痢的最適檢疫對象

雞白痢可以檢測抗原或抗體。而對于病原的檢測花費的時間和成本較高，且針對糞便的檢測結(jié)果不能反應(yīng)機體的真實感染狀況，所以國內(nèi)外更傾向于檢測抗體，因此了解雞白痢抗體的生成規(guī)律以及不同檢測方法的特點是非常重要的。

較為簡便的雞白痢血清學(xué)診斷方法包括平板凝集實驗（全血/血清）、試管凝集實驗（全血/血清）和瓊脂擴散實驗（全血/血清/卵黃）。

?相較來說，平板凝集反應(yīng)時間迅速（2min），是唯一可進行現(xiàn)場檢測的方法，檢測節(jié)點是在性成熟后；

?試管凝集反應(yīng)時間較長（24h），準(zhǔn)確性較平板凝集更高，可在實驗室檢測，檢測節(jié)點是在性成熟后；

?瓊脂擴散反應(yīng)時間最長（24h~48h），準(zhǔn)確性最高，可在實驗室檢測，檢測節(jié)點是全飼養(yǎng)周期。

4.雞白痢感染與凝集抗體的對應(yīng)關(guān)系

在自然感染條件，不使用藥物、噬菌體、疫苗等防控產(chǎn)品條件下，發(fā)現(xiàn)雛雞產(chǎn)生凝集抗體的能力非常弱，而青年雞產(chǎn)生凝集抗體結(jié)果非常不穩(wěn)定，成年雞性成熟后，病原感染后很快抗體水平會升高，所以成年雞最適合進行凝集抗體的檢測。我們國家目前從國標(biāo)到行標(biāo)以及地方標(biāo)準(zhǔn)，基本都是采用全血平板凝集實驗來進行雞白痢檢疫。

5.我國雞白痢凈化場評估要求

我國疫控中心制定的凈化場評估要求規(guī)定，雞白痢采取血清學(xué)抽檢，祖代以上養(yǎng)殖場陽性率低于0.2%，父母代場陽性率低于0.5%；連續(xù)兩年以上無臨床病例；現(xiàn)場綜合審查通過。

三、雞白痢凝集抗原的研制

1.優(yōu)良的雞白痢凝集抗原需具備的特性

優(yōu)良的雞白痢凝集抗原需具備靈敏度高、特異性強、反應(yīng)速度快、凝集圖像清晰易辨、檢測結(jié)果穩(wěn)定和保存期長的特性。授課專家特別提及，從長期實踐來看，保存期越長的抗原，它的穩(wěn)定性越好。

授課專家提到，江蘇省家禽科學(xué)研究所自1959年建所后，即將雞白痢作為一項傳統(tǒng)研究項目，至今未曾間斷。上世紀60年代即開始篩選穩(wěn)定性良好的雞白痢抗原制造菌種，研制靈敏、快速、特異的雞白痢平板凝集染色抗原。經(jīng)過多年的研究與應(yīng)用，研制的染色抗原已達到國內(nèi)領(lǐng)先、國際先進水平。經(jīng)全國22個省、市、自治區(qū)，近百個科研、教學(xué)、生產(chǎn)單位應(yīng)用，總檢測雞數(shù)近2億羽。并在上世紀70-80年代，成功實施國內(nèi)三大部級原種雞場雞白痢凈化工作，包括黑龍江省哈爾濱原種雞場、北京種禽公司原種雞場和上海市新楊種畜場。

授課專家以北京種禽公司原種雞場的雞白痢凈化舉例。該原種雞場于1974年成立于北京昌平，1978年受雞白痢困擾與江蘇省家禽科學(xué)研究所合作開始雞白痢檢疫凈化；至1979年底，基本控制消滅雞白痢，建立了我國第一個無雞白痢沙門氏菌的原種雞場；后期連續(xù)跟蹤檢疫至1986年，累計檢測種雞54622羽份，全部為陰性。專家講到，當(dāng)時的種雞場無論是硬件條件，生物安全措施與管理制度與目前種雞場相比均存在較大差距，但仍可做到徹底凈化的最關(guān)鍵因素就是抗原的質(zhì)量保障。

授課專家闡述了近年來該團隊在雞白痢凝集抗原的開發(fā)與應(yīng)用工作，如2018年與溫氏食品集團股份有限公司合作開展自家抗原研制與應(yīng)用，并在2年內(nèi)將這個國內(nèi)最大的黃羽肉雞育種企業(yè)完成了雞白痢的徹底凈化。在2019年，又與哈爾濱國生生物科技股份有限公司開展產(chǎn)品孵化，通過6年時間的努力已完成各項工藝的研究。

2.如何確保新產(chǎn)品的性能

主要5個方面：新菌種的核心優(yōu)勢；培養(yǎng)與制備工藝的技術(shù)改進與優(yōu)化；特異性與穩(wěn)定性保證；敏感性、批間重復(fù)性、環(huán)境使用穩(wěn)定性；臨床檢驗與實踐應(yīng)用。

授課專家提到，未進行篩選及選育的雞白痢菌株通常O抗原含量低、抗原成分不穩(wěn)定和遺傳穩(wěn)定性低。為了獲得優(yōu)良的抗原制造菌種，授課專家對菌種庫中保存的1000余株雞白痢沙門氏菌進行了篩選。江蘇省家禽科學(xué)研究所擁有數(shù)量豐富、時間跨度大（1953年至今）、地理分布廣的雞白痢沙門氏菌國內(nèi)分離株（其為CVCC提供的雞白痢沙門氏菌參考菌株占比近80%），基于上述菌種資源，成功篩選到抗原候選菌株。同時為了方便篩選，還創(chuàng)新建立了配套的雞白痢沙門氏菌顯微菌落分型方法，用于區(qū)分標(biāo)準(zhǔn)型（S）、中間型（I）和變異型（V）。

3.新菌種的核心優(yōu)勢

（1）涵蓋所有菌落型：YBC/yBC/Ybc

（2）涵蓋所有血清亞型：標(biāo)準(zhǔn)型、變異型、中間型

（3）抗原高表達：O抗原產(chǎn)量提升2.14倍。

（4）特異性表位富集：富含O9、O122、O123三種O抗原分子。

（5）遺傳穩(wěn)定性強：抗原制備菌株傳代后15代后，檢測其菌落型變異率只有3.06%，其血清亞型無改變。未經(jīng)此方法篩選的菌株其菌落型變異率為篩選菌株的5.65倍，血清亞型變異率為篩選菌株的8.06倍。

4.培養(yǎng)與制備工藝的技術(shù)改進與優(yōu)化

授課專家講到，對研發(fā)產(chǎn)品進行了包括培養(yǎng)基配方篩選、最佳培養(yǎng)時間篩選、抗原的收獲方式優(yōu)化和抗原的滅活條件優(yōu)化等上百個制備工藝的技術(shù)改進與優(yōu)化。

以目前商品化的抗原產(chǎn)品為例，其使用標(biāo)準(zhǔn)陽性血清對抗原進行標(biāo)定，導(dǎo)致抗原濃度并不固定，可能造成檢測結(jié)果不穩(wěn)定的情況，而新產(chǎn)品采用固定抗原濃度來達到更穩(wěn)定的檢測效果。

專家提到，新產(chǎn)品針對雞的各種特異性質(zhì)控血清進行了特異性鑒定，并且進行了敏感性、批間重復(fù)性和環(huán)境使用穩(wěn)定性試驗，驗證了敏感性結(jié)果優(yōu)于商品化產(chǎn)品2-4倍；三個批次檢測結(jié)果完全一致，重復(fù)性良好；產(chǎn)品的極限溫度檢測結(jié)果穩(wěn)定。在臨床上進行了檢測和應(yīng)用，同時將現(xiàn)場的全血試驗血清在實驗室進行復(fù)核。

5. 新抗原的特點

（1）特異性強（無假陽性）

（2）敏感度高（優(yōu)于商品化產(chǎn)品1~2個稀釋度，無假陰性）

（3）反應(yīng)速度快（#和+++的陽性樣品約20-30s即可凝集）

（4）凝集圖像清晰易辨（凝集顆粒明顯，底液澄清，利于判定）

（5）檢測結(jié)果穩(wěn)定（批間和批內(nèi)檢測結(jié)果完全一致）

（6）保存期長（可4-8℃穩(wěn)定保存5年以上）

（7）使用劑量低（每個反應(yīng)只需25μL，僅商品化產(chǎn)品一半）

四、總結(jié)

本次授課專家的報告圍繞雞白痢展開，首先闡述了理論與技術(shù)支撐：系統(tǒng)梳理了雞白痢的危害、鑒別方法及防控邏輯，明確了雞白痢與雞傷寒的關(guān)聯(lián)與區(qū)分，為相關(guān)疾病的基礎(chǔ)研究和臨床診斷提供了清晰的理論框架和技術(shù)參考。其后，做了生產(chǎn)實踐指導(dǎo)：針對種雞感染雞白痢對產(chǎn)蛋率、孵化率等生產(chǎn)性能的影響，以及不同生長階段的感染特性，提出了具體的檢疫對象、方法和凈化標(biāo)準(zhǔn)的講解，為養(yǎng)殖場科學(xué)防控雞白痢、提升生產(chǎn)效益提供了可操作的實踐方案，助力行業(yè)降低經(jīng)濟損失。最后，展示了技術(shù)創(chuàng)新與應(yīng)用價值：詳細介紹了雞白痢凝集抗原的研發(fā)成果，尤其是新抗原在特異性、靈敏度、穩(wěn)定性等方面的突破，為我國雞白痢的長期防控和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化提供了關(guān)鍵技術(shù)保障，為雞白痢的凈化提供了很好的手段，對推動家禽養(yǎng)殖業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展具有重要現(xiàn)實意義。

會議筆記由哈爾濱國生生物科技股份有限公司王美嬌記錄整理。